De la qPCR a la PCR digital: detección de biomarcadores de resistencia a fármacos en perros con cargas parasitarias bajas
En julio demostramos en BMC Veterinary Research que LeishGenR™ detecta por qPCR biomarcadores de resistencia a fármacos directamente en muestras clínicas de perros. Funciona bien cuando la carga parasitaria es alta, como en la médula ósea o el ganglio linfático. Pero muchas de las muestras que los veterinarios envían para el seguimiento son de sangre o de piel, donde hay pocos parásitos y la qPCR pierde fiabilidad.
Nuestro nuevo estudio, aceptado en Parasites & Vectors, da el siguiente paso: la PCR digital. El test divide cada muestra en miles de pequeñas reacciones independientes y cuenta una a una las moléculas de ADN diana. Así se obtiene una cuantificación absoluta, sin curvas estándar. Una sola reacción 4-plex lee a la vez los biomarcadores del alopurinol, el antimoniato de meglumina y la miltefosina.
Validamos el ensayo con aislados de Leishmania infantum ya caracterizados por secuenciación del genoma completo y por qPCR. Los perfiles de resistencia coincidieron por completo para el alopurinol y la miltefosina, y casi por completo para el antimoniato de meglumina, con una alta repetibilidad entre análisis. En muestras clínicas de perros de España y Grecia, los perfiles coincidieron con la qPCR en todas las muestras con carga parasitaria alta. En las muestras con una carga parasitaria muy baja, combinar unas 80.000 reacciones permitió obtener un perfil de resistencia fiable donde la qPCR no pudo.
La PCR digital lleva el análisis de resistencias a fármacos a las muestras en las que resultaba más difícil y ayuda al veterinario a saber si una recidiva se debe a resistencias. El ensayo ya está disponible para transferencia de tecnología a laboratorios de referencia.
Referencia: Carrasco-Martín M, Roura X, Martí-Carreras J, Ferrer L, Francino O. Genomic drug resistance biomarkers in Leishmania infantum: from quantitative real-time PCR to digital PCR. Parasites & Vectors (2026, aceptado).
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